ВИРУС ГЕПАТИТА Е, ВГЕ
(Hepatitis E virus)
— возбудитель гепатита Е, ранее известного как гепатита ни-А, ни-В с фекально-оральным механизмом передачи. Описан впервые М. С. Балаяном и соавт. в 1983 г. по данным обследования экскретов добровольца, экспериментально зараженного материалом от больных ГЕ людей. По основным фенотипическим признакам ВГЕ мог бы быть причислен к семейству калицивирусов, однако состав и организация его генома полностью исключают эту таксономическую принадлежность. Можно лишь предполагать, что ВГЕ в единственном пока числе представляет отдельный род вирусов. Изоляты ВГЕ из различных географических регионов (Индия, Бирма, Пакистан, Средне-Азиатские республики СНГ, Мексика) в антигеном отношении сходны между собой, в пределах разрешающей способности использованных для этих целей метода иммуноэлектронной микроскопии, а также серологических реакций с рекомбинантными антигенами.
Частицы ВГЕ представляют собой округлые образования диаметром около 32 нм (вариации от 27 до 34 нм), построенные из идентичных структурных элементов и лишенные оболочки. Вирусным геномом является одноцепочечная РНК позитивной полярности.
Клонирование генома вируса позволило характеризовать РНК ВГЕ по химическому строению и генным функциям. Полноразмерная РНК насчитывают около 7500 нуклеотидных оснований и включает в себя три независимые открытые рамки считывания (ОРС), каждая из которых кодирует синтез определенного белка или группы белков. Геном организован таким образом, что на N — концевой аминокислотной последовательности располагаются неструктурные белки, а на С-концевой — структурные.
Такое расположение белков свойственно калици- и тогавирусам, но не пикорнавирусам. Отдельные структурные белки ВГЕ были экспрессированы в кишечной палочке и с помощью бакуловирусного вектора в клетках насекомых. Такие белки послужили антигенным аналогом ВГЕ при разработке твердофазного иммуноферментного теста для определения антител к вирусу (анти-ВГЕ), а также создания экспериментальных вакцин.
Частично очищенный ВГЕ седиментируется при 183S и имеет плавучую плотность 1,29 в градиенте тартрата калия с глицеролом, по другим данным в хлориде цезия выявляются две фракции ВГЕ, соответствующие плотностям 1,30 и 1,35 г/см 3.
ВГЕ хорошо сохраняется при температуре —20° С и ниже, однако, хранение при температурах выше 0° С и особенно последовательное замораживание-оттаивание ведет к быстрому разрушению вируса. Он чувствителен также к воздействию хлор- или йодсодержащих дезинфектантов. ВГЕ не удавалось адаптировать к размножению в клеточных культурах при использовании обычных методов культивирования, однако, персистентная инфекция была достигнута, когда клетки печени и почек, извлеченные из экспериментально зараженных обезьян на высоте заболевания, ко-культивировали с "бессмертными" клеточными линиями.
Идентификация ВГЕ ранее производилась методом иммуноэлектронной микроскопии, в настоящее время для этой цели широко используются кДНК гибридизация и ПЦР. В специализированных научных учреждениях для выделения может проводиться заражение лабораторных приматов. Известно, что более 10 видов обезьян Старого и Нового Света восприимчивы к гепатитной Е инфекции; но наиболее часто лабораторной моделью ГЕ служат яванские макаки (Масаса fascicularis). О развитии инфекции судят по:
- повышению уровней сывороточных аминотрансфераз;
- экскреции вируса с фекалиями;
- образованию вирусспецифических антител; и
- патоморфологическим изменениям печеночной ткани.
У зараженных ВГЕ обезьян значительно чаще, чем у больных людей, отмечается двухфазный подъем аминотрансфераз, в частности, АлАТ: первый приходится на 6-12 день после заражения, и второй — на 21-27 день. Второй подъем, как правило, совпадает по времени с появлением патоморфологических признаков острого гепатита.
В печени обезьян на высоте развития инфекции может быть обнаружен антиген ВГЕ, выявляемый методом флюоресцирующих антител (МФА). Этот антиген располагается в цитоплазме гепатоцитов в виде небольших светящихся гранул на фоне сохранившейся структуры клеток.
В результате успешного клонирования генома ВГЕ стало возможным изготавливать рекомбинантные и синтетические антигены, пригодные для использования в серологических тестах, главным образом, иммуноферментном анализе. Антигенным компонентом таких тестов служит комбинация белков, или их фрагментов, кодируемых ОРС2 и ОРСЗ, которые, как считают, располагаются на поверхности вириона ВГЕ. Несмотря на отдельные сомнения в отношении специфичности выявляемых таким способом антител, данные методы нашли широкое применение в диагностической практике.
